杜培坤+李妍怡+王艳玲+金红
【摘要】意图 讨论脑心通对缺血再灌注导致神经细胞危害的维护机制。办法 选用重复夹闭双侧颈总动脉结合鼠尾放血引起循环血量削减的办法制备拟脑缺血再灌注危害大鼠模型，调查大鼠脑安排细胞内Ca2+含量，并做海马区HE染色，调查海马安排的病理改动。成果 脑海马细胞内Ca2+含量显着下降。定论 脑心通能够削减脑缺血再灌注危害后细胞外Ca2+进入细胞内，然后能够避免细胞内Ca2+超载危害，维护脑安排及神经细胞。
【关键词】脑心通；缺血再灌注；Ca2+
【中图分类号】R285 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.04..03
急性缺血性脑血管病是危害人类健康的常见病和多发病之一，具有较高的致死率、致残率及复发率，中医药对脑血管病的医治越来越遭到重视，特别中药复方制剂能够经过多环节、多途径、多靶点效果于脑缺血各环节，其间脑心通胶囊是由黄芪、丹参、桃仁、红花、地龙等中药组成的复方制剂，多项研讨标明，脑心通胶囊医治气虚血瘀、头绪闭阻导致的中风临床效果切当，是临床防治缺血性脑卒中的有用药物[1]。为讨论其医治急性缺血性脑血管病的部分效果机制，本试验用重复夹闭双侧颈总动脉结合鼠尾放血的办法制备拟脑缺血再灌注危害大鼠模型，调查大鼠脑安排细胞内Ca2+含量改动及海马安排的病理改动进行研讨。
1 材料与办法
1.1 材料
选用4月龄无特定病原体（SPF）级SD大鼠50只，步长脑心通胶囊，细胞内钙离子测试剂，流式细胞仪。
1.2 试验办法
1.2.1 动物分组
选取SD大鼠50只，男女参半，随机分为空白组10只和假手术组10只，余30只造模。然后再选用卒中指数评分规范选取20只造模成功的大鼠，随机分为模型组10只、步长脑心通组10只。
1.2.2 模型制备
选用由Nordtrom树立的2VO阻断缺血模型，加鼠尾放血改进后用于本试验模型制备[3]。要求术前禁食水。用水合氯醛腹腔内打针麻醉大鼠，仰卧固定，被皮，惯例消毒，沿颈正中皮肤切断，再用神经剥离器别离颈部双侧迷走神经，明晰露出双侧颈总动脉，用无创动脉夹闭颈总动脉，阻断血流10 min，距离10 min，再用无创动脉夹闭颈总动脉，阻断血流10 min，然后康复血流。阻断的一起，剪鼠尾放血，造满足脑血流低灌注，最终热凝止血，构成急性脑缺血再灌注危害动物模型。
假手术组：与造模组操作过程大致相同，但不阻断颈总动脉亦不放血。
1.3 点评造模成功的规范
选用卒中指数评分规范[3]。卒中指数评分如下：毛发杂乱、全身哆嗦各1分，运动削减或愚钝1分，耳触觉愚钝为3分，眼固定状张开为3分，后肢外展呈八字为3分，上睑下垂为1分，转圈为3分，惊厥或迸发运动为3分，极度衰弱为6分。总分25分，>10分显着有危害。选取卒中指数>10分的动物为造模成功的
动物。
1.4 目标检测
用流式细胞仪检测脑安排海马区Ca2+。用光学显微镜调查大鼠脑安排海马CA1区的形态学改动。
1.5 计算学处理
数据选用SPSS 14.0计算软件处理，计量材料以“x±s”表明。以P<0.05为差异有计算学含义。
2 结 果
2.1 脑心通对脑缺血再灌注危害大鼠卒中指数评分的影响
大鼠的卒中指数评分步长脑心通组比模型组低，且随时间推移呈递减趋势。第1天，步长脑心通组与模型组比较，差异无计算学含义（P>0.05），提示脑缺血再灌注危害模型制备成功，而且各用药组动物选取无差异；第6天，步长脑心通组与模型组比较，差异无计算学含义（P>0.05）；第12天，步长脑心通组与模型组比较，差异有计算学含义（P<0.05），阐明步长脑心通能显着改进模型大鼠神经行为症状和体征，有较好效果，但中药医治效果起效慢。
见表1。
2.2 脑心通对脑缺血再灌注危害大鼠脑海马安排细胞内Ca2+含量的影响
脑缺血再灌注后，与空白组、假手术组比较，模型组大鼠脑内海马安排细胞内Ca2+含量显着升高，阐明模型组发生了显着的细胞内Ca2+超载效果；与模型组比较，脑心通组较模型组细胞内Ca2+含量均下降，差异有计算学含义（P<0.05）。阐明脑心通可有用缓解脑缺血再灌注危害后细胞内Ca2+超载效果。见表2。
2.3 脑心通对脑缺血再灌注危害大鼠脑海马安排结构的影响
脑心通能够减轻脑缺血再灌注引起的大鼠脑海马安排危害，减轻神经细胞的水肿、变性、坏死等，维护及修正神经细胞。
①空白组及假手术组：海马CA1区神经细胞呈圆形或椭圆形，散布密布，摆放规矩。
②模型组：海马CA1区神经细胞摆放稀少、紊乱，丢掉严峻，胞浆内嗜酸性染色增强，细胞核固缩或细胞核形状不规矩，周围空隙及血管空隙显着
增宽。
③步长脑心通组：海马CA1区神经细胞稍稀少，呈圆形，椭圆形，或多角形，细胞摆放较有序。
3 讨 论
Ca2+广泛散布于人体的细胞和体液之中，对细胞的代谢和功用有重要的调节效果，在中枢神经系统内，Ca2+被称为神经生理学家的“DNA”，它作为神经细胞内的重要信使，参加神经递质的组成与开释，以及神经细胞内多种酶学的转运等活动[4]。生理状态下，细胞表里钙离子坚持动态平衡。当脑缺血再灌注时，Ca2+平衡遭到损坏，很多Ca2+内流引起Ca2+超载。首要能量代谢妨碍，ATP耗竭，使Na+内流，K+外流，神经细胞模去极化，电压依赖性钙通道敞开，Ca2+进入细胞内添加，一起能量耗竭，钙离子泵能量妨碍，使细胞内Ca2+传出才能下降，可使细胞Ca2+内超载；但细胞内Ca2+增多主要是由敏感性、主动性的受体门控通道来完结，这些通道特别是NMDA-R激活引起门控性通道的敞开，在缺血缺氧状态下因为谷氨酸的过多开释以及吸取妨碍而被激活，导致细胞内的Ca2+超载，引起神经细胞病理性危害。神经细胞内Ca2+超载时，可导致5-羟色胺及去甲肾上腺素开释增多，引起脑血管痉挛，部分血流变情况恶化，加剧脑缺血；神经细胞内Ca2+超载时，很多Ca2+堆积于线粒体，与线粒体内含磷酸根的化合物结合，构成不溶性磷酸钙，构成氧化磷酸化电子传递脱耦联，致使膜电位损失引起跨膜离子流失效，神经细胞呼吸功用遭到按捺，导致不可逆性神经细胞危害；神经细胞内Ca2+超载时，可致胞浆内或溶酶体内Ca2+依赖性酶类和磷脂酶类很多激活，使神经细胞膜结构分化，神经细胞骨架损坏，导致神经细胞逝世[5]；神经细胞内Ca2+超载时，可激活磷脂酶A2和磷脂酶C，使膜磷脂降解，发生很多游离脂肪酸，特别是花生四烯酸，构成脂质膜流动性下降及通透性增高，导致神经细胞肿胀，以及花生四烯酸在环氧酶及脂氧酶效果下生成前列腺素、白三烯和血小板激活因子等活性物质，并在氧自由基的效果下，发动膜脂质过氧化，构成脂性自由基，损坏生物膜，并进一步促进受体通道兴奋性氨基酸的开释，构成兴奋性氨基酸的毒性，加剧神经细胞危害[6] 。
本试验成果标明：中药复方制剂脑心通能够减轻脑缺血再灌注引起的大鼠脑海马安排危害，减轻神经细胞的水肿、变性、坏死等，维护脑安排；还能够削减脑缺血再灌注后细胞外Ca2+经过电压依赖性通道和受体门控性通道进入细胞内，下降脑缺血再灌注引起的大鼠脑神经细胞内Ca2+的含量，然后能够避免细胞内Ca2+超载引起的一系列病理危害，维护神经细胞。
参考文献
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本文修改：徐 陌
