陈志磊 安凤杨 刘笑宇 刘欢 郭云然 于海琦
[摘要]意图：剖析与评论燃煤型砷中毒患者中抑癌基因p1 6骤变与甲基化的状况及含义。办法：选取120例2013年4月-2015年5月在我院收治的燃煤型砷中毒患者，按照皮肤病变病理学确诊成果，将一切患者分为癌前组（24例）、癌病组（20例）及一般病变组（76例），经过PCR与PCR-SSCP产品克隆测序检测骤变热点显子，并经过甲基化内切酶剖析第1外显子。成果：经过PCR与PCR-SSCR产品克隆测序对燃煤型砷中毒患者外周血DNA进行剖析，没有检测出抗癌基因p16第2外显子发作骤变。经过SmaI酶切燃煤型砷中毒患者外周血DNA后，癌变组患者中，扩增出抗癌基因p16第1外显子片段4例，一般病变组与癌前组患者没有检测出SmaI位点甲基化状况。定论：研讨标明，p16基因因为高度甲基化是形成p16基因在砷性肿瘤中失活的要害办法，并且在砷致癌中发挥着重要效果。
[要害词]抑癌基因p16；燃煤型砷中毒；骤变；甲基化
1材料与办法
1.1一般材料
选取120例2013年4月-2015年5月在我院收治的燃煤型砷中毒患者，其间92例男性，28例女人，年纪为19-60岁，平均年纪为（47.2±4.5）岁。按照皮肤病变病理学确诊成果，将一切患者分为癌前组（24例）、癌病组（20例）及一般病变组（76例）。三组患者临床材料差异性不显着，P>0.05，不具有可比性。
1.2仪器与试剂
所用试剂为dNTP、Taq DNA聚合酶、内切酶SmaI以及电泳用琼脂糖，以上试剂均为上海TaKaRa公司供给。所选仪器为全自动紫外分光光度计、电泳仪等。
1.3提取DNA
空腹采纳患者2ml静脉血，并行EDTAK2抗凝，选用酚氯仿法对基因组患者DNA进行抽提，紫外分光光度计施行定量，将其稀释到大约100ng/ul，在-20℃环境下保存。
1.4 PCR-SSCP
一般p16基因点在第2外显子发作，并且因为第2外显子相对比较大，经过两对引物施行扩增，经过琼脂糖凝胶电泳对产品进行判定后，去PCR产品5ul，再参加SSCP缓冲液（5u1）混匀。
1.5甲基化剖析
经过内切酶Sinai施行DNA酶切，并在30～C环境下进行16h的消化，65℃环境下灭活大约20mm，将消化完结的DNA当作模板，并对p16基因榜首外显子进行扩增，CG甲基化将这种酶切效果阻断，若DNA经过SmaI消化后仍旧能够向榜首外显子扩增，表明这种基因SmaI位点甲基化。
1.6统计学处理
选用SPSS16.0软件进行统计学处理，）（2查验数据剖析，P<0.05表明差异性比较显着，具有统计学含义。
2成果
2.1抗癌基因p16第2外显子骤变检测成果
经过PCR与PCR-SSCR产品克隆测序对燃煤型砷中毒患者外周血DNA进行剖析，没有检测出抗癌基因p16第2外显子发作骤变。
2.2剖析抗癌基因p16第1外显子甲基化成果
经过SmaI酶切燃煤型砷中毒患者外周血DNA后，癌变组患者中，扩增出抗癌基因p16第1外显子片段4例，一般病变组与癌前组患者没有检测出SmaI位点甲基化状况，见表1。
3评论
抑癌基因p16是近年来所研发的一种在细胞分裂中直接效果的一种基因，抑癌基因p16首要参加肿瘤病变发作及开展，其间的按捺细胞p16和视网膜细胞瘤基因、p53基因、细胞周期素依赖性集美以及细胞周期素等组成周期细胞反应调理环，对人体细胞周期具有调控效果。本研讨经过PCR、PCR-SSCP产品克隆测序检测骤变热点显子，没有检测出骤变现象。并经过甲基化内切酶剖析第1外显子，研讨成果发现，经过SmaI酶切燃煤型砷中毒患者外周血DNA后，癌变组患者中，扩增出抗癌基因p16第1外显子片段4例，一般病变组与癌前组患者没有检测出SmaI位点甲基化状况。砷是一种致癌物质，在生物机体与外在环境中均存在甲基化代谢转化进程，选用甲基化的办法下降砷的毒性，但是，因为砷转化途径类似于DNA甲基化，很可能会导致抑癌基因或许原癌基因甲基化形式发作变化，具有致癌效果，而p16基因因为高度甲基化是形成p16基因在砷性肿瘤中失活的要害办法，并且在砷致癌中发挥着重要效果。
