孙瑜嬬++孙理军++孙耀光++张琪++刘熙如++柏云飞
摘要：意图 探討补肾中药对肾虚体质大鼠成长发育及脑安排胆碱乙酰化酶（CHAc）含量的调理效果。办法 选用“猫吓鼠”办法制造先天缺乏加后天失养复合型肾虚模型。造模大鼠随机分为模型组、左归丸组和右归丸组，空白组大鼠产自正常孕鼠。对仔鼠恫吓一起开端灌胃给药，药物组给予左归丸和右归丸混悬液，空白组和模型组予等量生理盐水，每日1次，接连3个月。调查大鼠成长发育一般情况，记载5～8周龄各组大鼠体质量和均匀食物利用率，ELISA检测大鼠脑安排CHAc含量。成果 仔鼠5～8周龄时，模型组较空白组体质量显着削减（P<0.01），左归丸组和右归丸组体质量较模型组显着添加（P<0.05，P<0.01），均匀食物利用率与体质量呈正相关；模型组脑安排CHAc含量较空白组显着下降（P<0.01），左归丸组、右归丸组较模型组显着升高（P<0.01）。定论 补肾中药可改进肾虚质大鼠成长发育落后情况并调理脑内CHAc含量，然后进步肾虚质大鼠学习回忆才干。
要害词：补肾中药；成长发育；胆碱乙酰化酶；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.09.012
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）09-0048-03
Effects of Kidney Reinforcing Medicine on Growth and Development and Brain Choline Acetyl Transferas Content of Rats with Kidney-deficiency Constitution SUN Yu-ru， SUN Li-jun， SUN Yao-guang， ZHANG Qi， LIU Xi-ru， BO Yun-fei （Shaanxi University of Chinese Medicine， Xianyang 712046， China）
Abstract： Objective To discuss the adjustment effects of kidney reinforcing medicine on growth and development and the content of choline acetyl transferase （CHAc） in rats with kidney-deficiency constitution. Methods The method of “cats scare rats” was used to build composite offspring rat models with deficiency and acquired dystrophy， and then the models were divided into model group， Zuogui Pill group and Yougui Pill group. The rats in blank group came from normal pregnant rats. Baby rats were scared and received gavage at the same time. All administration groups received suspension of Zuigui Pills or Yougui Pills. Blank group and model group received the same amount of normal saline， once a day， for 3 months. Growth and development of rats were observed. Weight and food utilization of rats aged 5–8 weeks in each group were recorded. The content of brain CHAc was detected by ELISA. Results When offspring were 5–8 weeks old， weights of rats in the model group were lower than blank group （P<0.01）； while weights of rats in Zuogui Pill group and Yougui Pill group increased significantly （P<0.05） and the food utilization was positively correlated with weight； the CHAc content in the model group decreased significantly compared with blank group （P<0.05， P<0.01）； while the CHAc content in Zuogui Pill group and Yougui Pill group increased significantly compared with the model group （P<0.01）. Conclusion Kidney reinforcing medicine can improve backward growth and development of rats with kidney-deficiency constitution and adjust CHAc in the brain， so as to promote the learning and memory ability of rats with kidney-deficiency constitution.
Key words： kidney reinforcing medicine； growth and development； CHAc； rats
基金项目：陕西省要点试验室研讨项目（15JS026）
通讯作者：孙理军，E-mail：1246503262@qq.com
以肾中精气亏虚、肾脏功用低下为首要表现的肾虚体质，是各类人群中常见的体质类型之一。中医理论有“肾主生殖、主蛰守位、在志为恐、在窍二阴”。前期研讨标明，肾虚体质模型动物较正常集体呈现精力萎靡、蜷缩不动、灵敏易惊、饮食饮水量少、体质量偏轻、成长发育缓慢、皮裘松懈、毛发稀少等一系列临床现象[1]。一方面“肾藏精生髓”，肾精缺乏无以充髓实脑而致脑失其用；另一方面“恐伤肾”，惊骇不解则致肾精亏虚、脑窍失养。本研讨以肾虚体质模型大鼠成长发育情况及脑安排胆碱乙酰化酶（CHAc）含量为研讨目标，评论补肾中药对肾虚体质成长发育及脑功用阑珊的调理效果。
1 试验材料
1.1 動物
SPF级12周龄SD大鼠雄性5只、未受孕雌性10只，体质量300～350 g，第四军医大学试验动物研讨中心，动物许可证号SCXK（陕）2014-001，3月龄雄性土猫1只，鲜活小鼠。自在摄食饮水，室温喂食。
1.2 药物、试剂和仪器
左归丸（批号120607）、右归丸（批号150310），河南宛西制药股份有限公司。CHAc ELISA试剂盒，艾莱萨生物科技（上海）有限公司，批号3646。全自动酶标仪（瑞士哈美顿），高速安排匀浆机（江苏金坛中大仪器厂），低速离心机（上海安亭/飞鸽）。
2 试验办法
2.1 分组、造模和给药
参照本课题组前期研讨办法[1]，大鼠适应性养殖7 d，10只雌鼠随机分红恫吓组6只、正常组4只，别离与雄鼠合笼交配。成功受孕后恫吓组孕鼠置于特质鼠笼，每日9：00-21：00置于猫笼旁被恫吓，一起在猫笼内放置鲜活小鼠令其捕食，使孕鼠在旁张望继续处于惊惧情况至产子；正常组不予恫吓天然临产。待2组所产仔鼠4周龄时，将正常组孕鼠所产仔鼠随机8只作为空白组，将恫吓组母鼠所产仔鼠随机24只分为模型组、左归丸组和右归丸组，每组8只，继续对此3组仔鼠进行恫吓，继续4周。按文献[2]公式换算，大鼠用药量约为成人6.25倍。左归丸成人服药量18 g/d，大鼠给药量为1.875 g原药材/（kg·d），蒸馏水配制成1.875 g/mL混悬液备用。右归丸成人服药量9 g/d，大鼠给药量为0.937 5 g原药材/（kg·d），蒸馏水配制成0.937 5 g/mL混悬液备用。对仔鼠恫吓的一起开端灌胃给药，药物组给予上述制备好的混悬液，空白组每日给予等量生理盐水10 mL/kg，每日1次，每周用药5 d停2 d，接连3个月。
2.2 成长发育调查
每日8：00调查各组大鼠活动情况，记载5～8周龄各组仔鼠体质量和进食情况。
2.3 胆碱乙酰化酶含量检测
末次给药1 h后断头处死，冰上敏捷剥离海马，4 ℃生理盐水冲刷，滤纸吸干水分，称重后置液氮冻存。制备10%海马安排匀浆，3000 r/min离心5 min，取上清液，严厉依照ELISA试剂盒说明书进行操作，于酶标仪450 nm处测定CHAc含量。
3 计算学办法
选用SPSS19.0计算软件进行剖析。计量材料以—x±s标明，组间比较选用独立样本t查验。P<0.05标明差异有计算学含义。
4 成果
4.1 一般情况
模型组较其他各组精力萎靡、蜷缩不动、灵敏易惊、饮食水量少、体质量轻、成长发育缓慢、皮裘松懈、毛发稀少且光泽度低、大便质软/不成形、小便多。
4.2 补肾中药对仔鼠体质量的影响
模型组仔鼠自5周龄开端至8周龄，体质量均较空白组下降（P<0.01），提示肾虚质模型动物成长缓慢。经药物干涉后，周龄相同的左归丸组与右归丸组仔鼠体质量均较模型组更趋向正常水平（P<0.05，P<0.01）。成果见表1。
4.3 补肾中药对仔鼠进食情况的影响
跟着仔鼠周龄的添加，各组仔鼠进食均有所增多。但与相同周龄仔鼠间比较，模型组仔鼠进食均远低于空白组，且经过药物干涉的左归丸组和右归丸组仔鼠进食水平较肾虚质有所改进且更趋于正常水平。成果见表2。
4.4 补肾中药对仔鼠脑安排胆碱乙酰化酶含量的影响
与空白组比较，模型组仔鼠脑安排CHAc含量显着下降（P<0.01）；与模型组比较，左归丸组和右归丸组仔鼠脑安排CHAc含量显着升高（P<0.01）。成果见表3。
5 评论
本试验选用“猫吓鼠”经典办法造模，调查被恫吓孕鼠，其日常活动显着削减，喜蜷缩旮旯、目光惊骇、极端灵敏易惊、大便质软乃至不成形、小便增多，且呈现早产现象，正常母鼠根本于合笼后18～22 d连续产子，而被土猫恫吓的孕鼠合笼后第15日便产子。一起被恫吓的孕鼠生殖率低于正常孕鼠，上述现象充分表现了中医藏象理论中肾主生殖、主蛰守位、在志为恐、在窍二阴的生理特性。
调查各组仔鼠一般情况发现，模型组较其他各组呈现精力萎靡、蜷缩不动、灵敏易惊、饮食饮水量少、体质量偏轻、成长发育缓慢、皮裘松懈、毛发稀少且光泽度低、大便质软或不成形、小便较多等一系列契合中医肾虚体质临床特色的现象；解剖时发现模型组2只仔鼠胸廓变形，胸骨倾向右侧，心脏异位。肾主骨、主成长发育，肾虚质仔鼠骨骼脏器发育的反常契合中医肾虚体质的临床特色。模型组大鼠体质量显着下降，标明肾虚质仔鼠因为先天禀赋缺乏加后天情志损害，致肾精亏本，呈现发育缓慢乃至变形的肾虚质表现。
“肾虚则智缺乏”（《医学心悟》），“肾藏精生髓”，脑为髓海，主神志思想，司机体运动，故肾虚则精不上承而脑髓空无、脑窍失养致脑失其用。肾精足，脑髓化生有源，脑髓足，则神旺；肾精虚则髓乏，不能上充于脑，表现为学习回忆才干下降和健忘神衰等[3-5]。
中枢胆碱能体系可经过大脑边缘体系及大脑皮层调理机体的学习回忆才干[6-8]。乙酰胆碱（Ach）是中枢胆碱能神经体系中重要神经递质之一，脑内细胞外液中Ach浓度与学习回忆才干密切相关。一起，Ach与不同胆碱能受体结合后可影响相应腺体的排泄，以及平滑肌的缩短、骨骼肌的发育、神经元的振奋等，故Ach的含量改变可充分反映机体的成长发育情况和学习回忆才干。CHAc作为一种转移酶，是胆碱能神经元中的特别标志酶，也是组成Ach的要害，只要在CHAc的催化下胆碱才干和乙酰輔酶A结合生成Ach。可以说脑内CHAc与Ach神经元简直平行散布[9-10]，故CHAc是反映机体学习回忆才干及成长发育情况的必要目标。比较各组大鼠脑安排CHAc含量差异发现，与空白组比较，模型组显着下降；与模型组比较，左归丸组和右归丸组显着升高；左归丸组和右归丸组间虽存在差异但无计算学含义。故肾虚质大鼠成长发育缓慢及学习回忆才干下降的机制与其脑内CHAc含量的削减密切相关，一起左归丸和右归丸对其具有改进和进步效果。先天缺乏加后天失养的复合型肾虚质动物模型表现了中医整体观念，契合中医情志致病的病因学原理，契合中医肾的藏象学理论，具有操作的可行性。本试验成果标明，经过左归丸和右归丸2种补肾药物的干涉医治，可显着改进肾虚质大鼠的成长发育和升高脑CHAc含量，为临床肾虚体质相关疾病和亚健康的防治供给试验根据。
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（收稿日期：2017-02-13）
（修回日期：2017-03-15；修改：华强）
